BIOLOGÍA Y MICROBIOLOGÍA AMBIENTAL

• MANEJO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO

Nuestra capacidad para observar detalles estructurales de las células depende de manera importante de las herramientas con las que contemos. El microscopio compuesto ha sido de crucial importancia  para el desarrollo de la ciencia y sigue siendo una herramienta básica en la investigación de rutina.

Objetivos

Reconocer la importancia del microscopio electrónico.
Manejar correctamente el microscopio electrónico.
Manejar correctamente el microscopio.
Señalar los componentes mecánicos y ópticos que constituyen el microscopio.
Realizar montajes húmedos.
Comprobar las propiedades ópticas que posee el microscopio.

Materiales,  Equipos y Reactivos

Microscopio compuesto eléctrico, portaobjetos, agua destilada, pelo de ceja, recorte de periódico (letras), hilo y cristales de sal ó azúcar.

Procedimiento

Manejo del Microscopio
Observación a través del microscopio: Para el uso correcto del mismo es importante y necesario seguir los pasos que se describen a continuación.

Iluminación
Prenda el microscopio con el objetivo de menor aumento (10X), observe por el ocular y ajuste la luz hasta lograr una iluminación uniforme en el campo de visión. El condensador debe estar cerca de la platina y el diafragma abierto.

Enfoque
Actualmente los microscopios poseen lentes parafocales, es decir, tienen un sistema sincronizado de enfoque a diferentes aumentos. Así una vez enfocada la preparación a menor aumento, queda enfocada al utilizar el objetivo de mayor aumento. Para un ajuste mayor, se debe mover ligeramente el tornillo micrométrico. Por el contrario, los microscopios antiguos tenían lentes no parafocales y se corría el riesgo que al girar el revólver y pasar de una lente de menor aumento a una lente de mayor aumento, ésta última tropezara con la preparación.

Para el enfoque el procedimiento técnico es el siguiente:

Enfoque visual a menor aumento
Se coloca la preparación centrada en la platina, mirando por fuera, se acerca el objetivo de menor aumento a la lámina, girando el tornillo macrométrico hasta que quede a una distancia ligeramente menor de la distancia de trabajo.
Ahora se enfoca girando el tornillo macrométrico hasta ver la imagen del preparado. Una vez obtenida la imagen, complete el enfoque con el tornillo micrométrico o de ajuste fino. Si es necesario, gradúa la intensidad luminosa ajustando la apertura del diafragma y la altura del condensador. Evite sobre iluminación.

Enfoque visual a mayor aumento
Una vez observada la preparación a menor aumento, pase a posición de trabajo el objetivo de mayor aumento, girando suavemente el revólver. Para el caso de microscopio con lentes parafocales, queda enfocado automáticamente y se afina el enfoque con el tornillo micrométrico. Si el microscopio posee lentes no parafocales, la lente puede tropezar con la preparación, entonces levante el objetivo empleando el tornillo macrométrico y proceda a acercar el objetivo a la preparación 8 menos de 1mm observando por fuera y no a través del ocular. Enfoque la imagen con el tornillo micrométrico alejando siempre el objetivo de la preparación.

Enfoque visual con el objetivo de inmersión (100X)
Coloque una gota muy pequeña de aceite de inmersión sobre la laminilla cubreobjetos (si la preparación es un extendido fijado, coloque la gota de aceite de inmersión directamente sobre la lámina) y proceda como en el caso anterior, teniendo en cuenta que la distancia de trabajo es menor con el objetivo de inmersión y se requiere mayor intensidad de luz.

Precaución
Una vez realizada la observación limpia con papel de lentes el objetivo de inmersión pues al solidificarse se puede dañar la lente. Para lo anterior, tenga cuidado de girar el revólver directamente al objetivo de menor aumento sin devolverlo ya que mojaría el objetivo de mayor aumento con aceite de inmersión. Finalmente retira la lámina del microscopio.

Recomendaciones para el cuidado del microscopio
Al limpiar las partes ópticas utiliza solo papel de lentes y xilol no use pañuelo. En caso de no lograr una limpieza apropiada, solicite ayuda al profesor. En las preparaciones de montajes húmedos o coloreados no debe quedar líquido sobre la laminilla o debajo de la lámina. Las preparaciones no deben tocar la lente de los objetivos. Al colocar o retirar una lámina, el objetivo de menor aumento debe estar en posición de trabajo. Cuando utilice micro preparados  fíjese que la laminilla quede en la cara superior de la lámina, es decir mirando hacia el objetivo. Mantenga seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algún líquido, séquela utilizando panola o papel absorbente. Limpie siempre el objetivo de inmersión después de usarlo, solo con papel para lente o papel de arroz. No debe retirar ningún componente óptico o mecánico del microscopio, ni intercambiar los oculares. Una vez utilizado, el microscopio debe quedar limpio y con el objetivo de menor aumento en posición de trabajo. Para transportar el microscopio tómelo del brazo del aparato con una mano y con la otra de la base, siempre en posición vertical  pues al voltearlo se pueden caer las lentes y el espejo.

Realizar un montaje húmedo de una letra pequeña de un periódico; Haga el montaje de la siguiente forma:

Sobre una lámina porta objetos limpia, coloque una gota de agua. Dentro de la gota de aguas ponga la letra impresa. Acerque la laminilla en posición oblicua y apoyando una arista sobre la lámina al lado de la gota, déjela caer suavemente sobre esta. La preparación debe quedar totalmente cubierta y embebida en el líquido. Evite el exceso de agua colorante en preparaciones coloreadas, en los bordes de la laminilla o sobre esta retire el sobrante con papel absorbente. Antes de colocar la lámina sobre la platina fíjese que esté completamente seca en la parte inferior. Si usted ve que la preparación se está deshidratando puede agregar agua en forma de gota y al lado de la laminilla.

Observar el montaje a través del microscopio
Inicie sus observaciones con el objetivo de menor aumento, el cual le brindará una imagen panorámica amplia y con mayor profundidad de foco. Luego pase a mayor aumento y precise las estructuras. Siéntese en posición correcta y cómoda para observar y dibujar. Acostúmbrese  a observar con ambos ojos abiertos eso le evitará la fatiga ocular.

Desarrolle:

¿Cuáles son los pasos para la elaboración de un montaje húmedo?
¿Cómo se procede para lograr una iluminación adecuada?
¿Cómo se enfoca el microscopio al iniciar la observación?
¿Cómo es la posición de la imagen resultante?
¿Al mover el portaobjetos de derecha a izquierda a qué lado se mueve la imagen?
¿Con qué objetivo se logra una imagen completa o un campo de visión más grande?
¿Con qué objetivo se observa mejor los detalles de una imagen?
¿Con el objetivo de mayor aumento se necesita mayor o menor iluminación de la que se necesita con el de menor aumento?

Observar una hebra de hilo, los cristales de sal o azúcar y el pelo de ceja ; Realice un montaje húmedo de cada uno; Obsérvelos al microscopio siguiendo los pasos anteriores.

Conclusiones finales:

¿Cuál es la utilidad del microscopio?
¿Qué imagen produce el microscopio simple?
¿Qué imagen produce el microscopio compuesto?
¿Qué imagen produce el objetivo?
¿Qué es poder de resolución?
¿Qué imagen produce el ocular?
¿Para qué sirve el aceite de inmersión?

Bibliografía

• CALLE Jean Claude, et al. “Biología Celular” de las moléculas a los organismos. Ed. Continental. 2000. Primera edición.
• LODISH Harvey and Arnold Berk. 2005. Biología Celular y Molecular. 5 edición Editorial Panamericana
• PANIAGUA Ricardo, et al. “Biología Celular”. Ed MacGraw-Hill Interamericana. 2003. Segunda edición.
• SOLOMÓN .2008. Biología. Octava edición Editorial Mc Graw-Hill.