Os ápices caulinares das plântulas (5 mm) foram cultivados em meio MS suplementado com 0,1, 1 e 2 mg/L BA e 3% de sacarose. O meio base MS foi usado como controlo.
O número de rebentos formados a partir dos meristemas apicais foi registado após 4 semanas de cultura e o explante inicial (parte basal do rebento formado in vitro - stump) foi inoculado por mais 4 semanas, sob as mesmas condições de cultura, e feito novo registo desta segunda inoculação.
Os rebentos isolados (2,0-3,0 cm) formados nas condições referidas foram induzidos a formar raiz em meio MS ou no mesmo meio base (completo ou ½ da concentração base) sem reguladores de crescimento.
Nas plântulas de Seseli o pH do meio de cultura foi ajustado para 6,2, valor acima do habitual 5,8, em que não se verificou resposta consistente.
Nas plântulas enraizadas (comprimento da raiz de pelo menos 2 cm) o enraizamento foi avaliado após um mês ou mês e meio de cultura.
As plântulas com um comprimento de, pelo menos de 6 cm, foram retiradas dos tubos de ensaio, separadas e aclimatizadas num fitotrão, em vasos contendem uma mistura 1:1 de terra de jardim e de areia, durante, pelo menos um mês e meio, antes de serem transferidas para condições de exterior, no Jardim Botânico.
Segmentos foliares (0,5-1,0 cm de comprimento) foram cultivados no mesmo meio base contendo 0,1, 1 e 2 mg/L de 2,4-D. Decorridos 4 meses de cultura ocorreu a formação de calos, com repicagens mensais para o mesmo meio, tendo sido contabilizados no final deste período de cultura.
Os calos nodulares foram repicados para meios com igual composição de 2,4-D, tendo-se verificado a produção desfasada de embriões somáticos, consoante a concentração de 2,4-D; a avaliação da indução de embriões foi concretizada em todos os meios ao final de 4 meses de cultura em 2,4-D.
Para a conversão de embriões em plântulas, os embriões somáticos cotiledonares, com pequenas porções de calos, foram transferidos para o meio base MS.
Algumas porções de calos embriogénicos foram subdivididas e de novo cultivadas em meios com 2,4-D, para manutenção do potencial embriogénico dos calos.
Dada a diferente resposta in vitro das culturas em 2,4-D com diferentes concentrações, a quantificação do número de embriões e de plântulas foi feita apenas no meio com 0,1 mg/L 2,4-D, seguindo as diferentes etapas.
Assim, nas culturas com esta concentração (0,1 mg/L) avaliou-se o número de calos formados após 4 meses. De seguida, decorridos 4 meses no mesmo meio, determinou-se o número de embriões formados. Repicados para meios MS para germinação dos embriões e desenvolvimento em plântulas, contabilizou-se o número de plântulas formadas após 3 meses.
As plântulas foram por fim deixadas nos tubos de ensaio, para prosseguir o alongamento da raiz durante 8 a 15 dias, sendo depois lavadas e deixadas apenas com água destilada.
As plântulas com um comprimento de, pelo menos de 6 cm, foram retiradas dos tubos de ensaio, separadas e aclimatizadas num fitotrão, em vasos contendo uma mistura 1:1 de terra de jardim e de areia, durante, pelo menos mês e meio, antes de serem transferidas para condições de exterior, no Jardim Botânico.
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1647 - Investigaciones socioambientales, educativas y humanísticas para el medio rural Por: Miguel Ángel Sámano Rentería y Ramón Rivera Espinosa. (Coordinadores) Este libro es producto del trabajo desarrollado por un grupo interdisciplinario de investigadores integrantes del Instituto de Investigaciones Socioambientales, Educativas y Humanísticas para el Medio Rural (IISEHMER). Libro gratis |
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