A colheita de exemplares das quatro subespécies nativas de Daucus carota foi realizada em populações naturais de Portugal Continental conforme indicado na Figura 3 e na Tabela 2, para estudos morfológicos e análise do teor de DNA.
As cinco províncias onde se realizaram as colheitas foram: Algarve - Ag; Alto Alentejo - AAL; Baixo Alentejo - BAl; Beira Litoral - BL; Estremadura - E.
Paralelamente foi realizada a caracterização dos óleos essenciais, em amostras do mesmo material vegetal, conforme descrito na secção 2.3.
As herborizações foram repetidas durante ciclos anuais diferentes, nas mesmas localidades e nas mesmas populações.
Espécimes testemunhos foram preparados in situ para a determinação taxonómica e depositados no Herbário COI (anexo I).
Tabela 2: Locais e períodos de colheita das quatro de subespécies nativas de Daucus carota utilizadas nos estudos morfológicos, na análise do teor em DNA e na caracterização de óleos essenciais.
Daucus carota (subespécies) /nº de populações |
Localidades (14) |
Calendário de colheita |
Daucus carota subsp. halophilus/6 |
1.Cabo S. Vicente/Ag* |
Maio/junho 2005, 2006; maio2008*; 2010. |
2. Arrifana/Ag* |
||
3. Cabo Sardão/BAl* |
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4. Cabo Espichel/E |
Junho/julho 2006, 2007; junho 2008; junho 2008; 2010. |
|
5. Cabo da Roca/E |
||
6. Cabo Carvoeiro/E |
||
Daucus carota subsp. gummifer/ 4 |
7. Nazaré/BL* |
|
8. Praia do Norte/BL* |
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9. Pedro de Moel/BL* |
||
10. Figueira da Foz /BL |
||
Daucus carota subsp. carota/3 |
11. Póvoa da Lomba/BL* |
Junho 2008*/ julho 2010; junho/julho 2010*, 2011. |
12. Meãs do Campo/BL* |
Julho 2005; julho2010*. |
|
10. Figueira da Foz/BL |
||
Daucus carota subsp. maximus /2 |
13. Cartuxa/AAL* |
Junho/julho 2006, 2007; junho2008*/julho 2010*. |
14. Montemor-o-Novo/AAL* |
*Localidades e datas de colheita das plantas para o estudo dos óleos essenciais.
A análise da morfometria dos frutos das quatro subespécies nativas de Daucus carota foi realizada num total de 33 plantas (subsp. carota, n = 10; subsp. gummifer, n = 10; subsp. halophilus, n = 9; subsp. maximus, n = 4) conforme se indica na Tabela 3 e no anexo II.
Tabela 3: Espécimes investigados para o estudo dos frutos de populações nativas das quatro subespécies de Daucus carota.
Taxa/ Total de espécimes |
Localidades / Voucher - Herbário COI |
Total frutos analisados |
Daucus carota subsp. carota/10 |
1-Vale das Pombas, Figueira da Foz, 2005, Tavares 16. |
1/3 |
2-Meãs do Campo, 2010, Tavares 139 |
1/3 |
|
3-Póvoa da Lomba, 2011, Tavares s.n. |
4/12 |
|
2- Meãs do Campo, 2011, Tavares s.n |
4/12 |
|
Daucus carota subsp. gummifer/10 |
4-Praia do Norte, 2005, Tavares s.n. + 2006, Tavares 56. |
1+1/6 |
5-Nazaré, 2005, Tavares 12 + 2006, Tavares 44 + Tavares 57 |
3+1+1/15 |
|
6-S. Pedro de Moel, 2005, Tavares s.n. + 2006, Tavares 55 |
1+1/6 |
|
1-Vale das Pombas, Figueira da Foz, 2005, Tavares s.n. |
1/3 |
|
Daucus carota subsp. halophilus/9 |
7-S. Vicente, 2006, Tavares 43 + 2007, Tavares 64 + 2008, Tavares 91 + 2010, Tavares 124 |
1+1+1+2/15 |
8-Cabo Sardão, 2006, Tavares 41 |
1/3 |
|
9-Arrifana, 2007, Tavares 63 |
1/3 |
|
10-Cabo da Roca, 2007, Tavares 68 |
1/3 |
|
11-Espichel, 2007, Tavares 69 |
1/3 |
|
Daucus carota subsp. maximus/4 |
12-Cartuxa, 2006, Tavares 52 + 2007, Tavares 73 |
1+2=9 |
13-Montemor-o-Novo, 2010, Tavares 138 |
1/3 |
|
Total |
13 Localidades e 33 espécimes voucher |
99 frutos |
Três frutos foram colhidos por planta e conforme a metodologia descrita na secção 2.1.2., procedeu-se à análise morfométrica com base nos seguintes carateres: comprimento, largura, comprimento dos espinhos, largura da base do espinho e número dos espinhos nas costas secundárias.
A análise estatística descritiva (média e desvio padrão da média) das variáveis quantitativas foi calculada para cada subespécie. O teste one-way ANOVA foi utilizado para avaliar as diferenças entre subespécies para as variáveis consideradas. As análises de variância foram realizadas utilizando os valores médios para cada amostra para evitar a pseudo-replicação. As duas variáveis, largura de fruto e largura das costas secundárias do fruto, foram transformadas com a função logaritmo para conseguir a normalidade e homocedasticidade. Todas as demais variáveis apresentam distribuição normal e homocedástica. As análises multivariadas foram realizadas para investigar a organização estrutural das subespécies estudadas com base nos carateres combinados dos frutos.
A análise de componentes principais (PCA) foi realizada utilizando os valores médios das amostras e de todas as variáveis.
Em complemento deste estudo foi analisado o detalhe dos frutos, particularmente ao nível da morfologia dos espinhos, em microscopia SEM.
Para a estimativa do nível de ploidia e conteúdo de DNA nuclear em plantas das diferentes populações foi utilizada a técnica de citometria de fluxo descrita na secção 2.1.3.
Folhas frescas de plantas foram recolhidas das populações silvestres das quatro subespécies nativas Daucus carota. O conteúdo em DNA foi estudado até 6 indivíduos por população (normalmente em 3 indivíduos/população) de cada uma das quatro subespécies da Tabela 2.
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